NEST细胞培养的培养步骤你知道吗

 

　　在NEST细胞培养过程中，经常加入5%-20%的胎牛血清，常使用的BI胎牛血清浓度是10%。高浓度的血清可能改变细胞的基因表达谱，影响后续实验的结果，我们在实验中使用10%的BI澳洲胎牛血清培养NEST细胞，效果非常好。但是有些细胞也会使用5%的BIFBS或者20%的BI胎牛血清，要根据具体细胞选择合适的BI胎牛血清浓度。

 

　　首先，倒掉旧的培养基，加入3ml新的培养基（有无血清的都可）洗涤一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍，然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。（巨噬细胞我们只吹打，不消化的）

 

　　其次，把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内，培养瓶事先加入培养基，放入培养箱内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。10分钟观察一次，20分钟，30分钟观察一次。选择一个时间点，已经有部分细胞贴壁的情况下，重新置于洁净台，底面朝上迅速倒出其中的培养基，加入3ml新培养基再轻轻洗一次。然后加入*培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。

 

　　如果一次效果还不理想，可重复多次。直到找到细胞形态。其中要注意，结合细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得好的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反之亦然。老化的会比较多，对后期实验结果是不好的。所以在NEST细胞培养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题.