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简单了解一下NEST细胞培养有哪些相关问题

点击次数：1609 更新时间：2020-12-17
 　　NEST细胞培养包括初代培养及各种细胞系，当生长达到一定密度后，都需做传代处理。传代的频率或间隔与培养液的性质、接种细胞数量和细胞增殖速度等有关。接种细胞数量大、细胞基数大、相同增殖速度条件下，细胞数量增加与饱和速度相对要快。连续细胞系和肿瘤细胞系比初代培养细胞增殖快，培养液中血清含量多时细胞增殖比少时快。以上情况都会缩短传代时间。
 
　　NEST细胞培养相关问题：
 
　　1、冷冻管应如何解冻？
 
　　取出冷冻管后，须立即放入37°C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。
 
　　2、细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？
 
　　除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
 
　　3、可否使用与原先培养条件不同之培养基？
 
　　不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。
 
　　4、可否使用与原先培养条件不同之血清种类？
 
　　不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生及大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
 
　　5、何谓FBS,FCS,CS,HS?
 
　　FBS和FCS是相同的意思，两者都是指胎牛血清，FCS乃错误的使用字眼，请不要再使用。CS则是指小牛血清。HS则是指马血清。
 
　　6、培养细胞时应使用5%或10%CO2？或根本没有影响？
 
　　一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定NEST细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7 g时，细胞培养时应使用10%CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时，则应使用5%CO2培养细胞。
 
　　7、何时须更换培养基？
 
　　视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。
 
　　8、培养基中是否须添加抗生素？
 
　　除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。