分享程序降温盒使用注意事项的几点经验

 

　　可实现每分钟1℃降温，大大提高冻存细胞的存活率，从冰箱拿出来后，泡沫内衬及异丙醇也可保证逐步升温，故也可用于细胞复苏。

 

　　用之前在盒夹层内注入100%浓度的异丙醇，管槽可放置1-2ml冻存管或储液管18个，同时管槽支架可防止管子与酒精接触，以防由于毛细作用而造成污染，或弄掉标签。

 

　　细胞冻存有两种方法：传统的方法是利用冷存管处于4℃、-20℃、-80℃保存，程序降温方法是利用设定程序由室温降低至-80℃，后再放置到液氮槽中长期保存。

 

　　程序降温盒的使用注意事项如下：

 

　　经验1：冻存盒外表面有刻度的吧，异丙醇液面要高于底线。

 

　　冻存盒肯定是先放在室温，然后放进去细胞，置于-80，利用异丙醇实现梯度降温啊。)

 

　　根据论坛里的讨论，异丙醇使用过一段时间后是要更换的，但是我一直没换过，也没发现很大问题。

 

　　经验2：我们实验室冻存盒平时放4度，需要冻细胞时直接拿出来用就可以了。第二天转移至液氮，贵重的细胞尽快转移，不然会影响复苏成活率的。一般是用5次就更换一下异丙醇。现在也有一些商品化冻存液可以直接丢进-80的，很方便，效果也不错的。

 

　　经验3：异丙醇的量是要保证的，不能低于表明的线，否则不能起到很好的程序性降温作用，我们是在4度放置，放了细胞后立马放到-80度冰箱，第二天再转移到液氮，效果很不错。异丙醇熔点：-87.9度的色透明具有乙醇气味的可燃性有毒液体。注意了有可燃性!急性毒性：口服-大鼠LD50:5840毫克/公斤;口服-小鼠LC50:3600毫克/公斤。刺激数据：眼睛-兔子100毫克/!请注意清理!

 

　　经验4：应该不可以把冻存盒放4°的，因为梯度降温的起始点是室温20°左右，所以从-80℃拿出来的冻存盒应该现在室温静置一段时间待其恢复到室温再使用。而其中的异丙醇应使用6~7此后更换一次，而且保证液体量达到刻度线，否则降温效果会受到影响。

 

　　经验5：冻存盒里的异丙醇一般是250ml，低于刻度了要加上，理论上是5次以后更换异丙醇，但是异丙醇对环境有害，我们可以多用几次，只是少了的时候要加满。还有冻存液里面的DMSO对细胞有毒性，尤其是室温的时候，所以冻存盒和冻存液先放4°，等把细胞用冻存液重悬好了放在冻存盒里，还放回4°，等到出细胞间的时候再拿到-80°里面保存。过夜再转入液氮。