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nest共聚焦皿和共聚焦板使用方法
NEST玻底培养皿和玻底培养板使用方法
近日来很多客户向我们咨询NEST玻底皿/板的使用方法,这里我们将NEST玻底皿/板的常规使用方法刊登出来供大家参考。
1 预平衡:在玻底培养皿加入3ml培养液,在培养箱中放置15分钟。
2 加细胞:吸去培养液,在底孔中加入500ul含细胞的培养液。在培养箱中放置2小时,
让细胞沉降贴壁。
3 加培养液:小心加入2-3ml不含细胞的培养液。该步骤用于为细胞提供足够的培养
液,同时减少由于水份挥发带来的渗透压的变化。
*根据实验的要求,可以合并步骤2和3,在预平衡后直接加入2-3毫升含细胞的培养液。
多聚赖氨酸包被
1. 将浓度0.01%(100ug/mL)的多聚赖氨酸溶液加入玻底板或玻底皿中(爬片可置于普通皿内进行加液),以刚好盖满玻底(或玻片)为准,将上盖盖好,放到培养箱中(37℃ 5%CO2)包被30分钟。
2. 30分钟后取出板或皿,用吸管将多余的多聚赖氨酸溶液吸出。换吸管,加入三蒸水,没过底,冲洗三次,再将水吸出来。反复三次。整个过程需在无菌操作台上进行,并且保证吸管无菌。
3. zui后将铺好的板(或皿)放于培养箱待用。
多聚赖氨酸及明胶包被方法
多聚赖氨酸(分子量30000-70000),用0.1M硼酸 /NaOH缓冲液PH8.4 (高压灭菌)做100倍稀释成200μg/mL应用液,0.22μm滤膜(可用一次性针头过滤器CA 0.22μm)过滤。PLL滴加于培养面上,保证全部覆盖,室温guoye。次日吸去多余部分(可回收),双蒸水洗两遍,置于超净台中紫外线下风机吹干即可。
明胶母液(2%浓度)用去离子水稀释成浓度1%(或0.1%,有条件的建议多尝试下,确定zui符合自己用的浓度),国产或进口均可。建议配置好的包被液做一次高温高压灭菌。将包被液滴加在培养面上,保证全部覆盖,37℃包被1~2小时,或4℃冰箱guoye,待用时取出吸去多余部分,可用培养液清洗1~2次后使用